消痛貼膏中潤濕劑的透皮促透作用研究
　　【摘要】  目的評價消痛貼膏中潤濕劑的透皮促透作用。方法選擇消痛貼膏中主藥獨(dú)一味所含木犀草素為模型藥物，采用離體擴(kuò)散池法，以高效液相色譜測定接受液中木犀草素的含量。含量測定采用platisil c18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，迪馬公司）；乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）為流動相；檢測波長為350 nm；流速1.0 ml·min-1。結(jié)果木犀草素進(jìn)樣量在0.040 88～2.044 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝0.999 8。與對照組滲透系數(shù)0.373 2相比，加潤濕劑組滲透系數(shù)3.97，滲透系數(shù)增加10.63倍。結(jié)論該潤濕劑能增加消痛貼膏中木犀草素的滲透速率和累積透過量。
　　【關(guān)鍵詞】  消痛貼 潤濕劑 促透 木犀草素
　　中藥等傳統(tǒng)醫(yī)藥中的外用制劑中的有效成分一部分在體表起消除皮膚炎癥、殺菌等作用外，另一部分可以透過皮膚角質(zhì)層進(jìn)入皮下及肌肉組織局部，吸收進(jìn)入體循環(huán)，產(chǎn)生全身或局部治療。傳統(tǒng)的中藥透皮給藥制劑有散劑、軟膏劑、硬膏劑等。近年來，隨著制藥技術(shù)的進(jìn)步和藥用高分子藥用材料的應(yīng)用，諸如涂膜劑、巴布劑、凝膠劑等新劑型也多有應(yīng)用。為了促進(jìn)處方中有效成分的透皮吸收，通常會在制劑中加入一定的透皮吸收促進(jìn)劑。透皮吸收促進(jìn)劑的加入量、加入方式以及和基質(zhì)的相容性成分為中藥透皮給藥制劑的處方設(shè)計和制備工藝的難點(diǎn)。經(jīng)過檢索，在我國批準(zhǔn)上市中藥品種中，消痛貼膏（國藥準(zhǔn)字：z54020113）中促透劑的加入方法很有特點(diǎn)：將促透劑（潤濕劑）與主藥分開，使用時將藥貼的塑料薄膜揭除，將小袋內(nèi)的潤濕劑均勻涂在中間藥墊表面，敷于患處或穴位。本研究采用擴(kuò)散池評價消痛貼膏中潤濕劑的促透作用。
　　1  儀器與材料
　　hp8453e紫外可見光譜儀（aglient公司）； aglient 1100型高效液相色譜儀（aglient公司）；platisil c18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱；ryj－6a型藥物透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。消痛貼膏（奇正藏藥有限公司，批號070632）。木犀草素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111520-200504）。木犀草素單體（南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，批號qzm07110， hplc檢測含量大于90%）。甲醇為色譜純（merck公司）；其他試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；雙蒸水，自制。昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g（普通級，許可證號scxk 2003-0003，上海斯萊克動物有限公司，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物房二樓）。
　　2   方法與結(jié)果
　　2.1   木犀草素體外透皮實(shí)驗(yàn)分析方法的建立
　　2.1.1   hplc測定色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)檢測波長的選擇： 參照《中國藥典》［1］獨(dú)一味含量測定項(xiàng)下方法，吸收波長選擇為350 nm。
　　色譜條件：色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（platisil c18， 5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相，乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）；檢測波長350 nm；流速1.0 ml·min-1；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按木犀草素計算應(yīng)不低于3 000，兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。結(jié)果見圖1～2。
　　圖1  木犀草素對照品hplc圖（略）
　　圖2  樣品hplc圖（略）
　　2.1.2  木犀草素hplc測定方法學(xué)考察供試品溶液的制備：將消痛貼膏藥粉用10倍20%的乙醇提取3次，60 min/次，收集提取液，回收乙醇至干，得提取物。取消痛貼膏藥粉提取物35 mg，加入10 mg木犀草素單體，實(shí)驗(yàn)組溶于2 ml的奇正潤濕劑，稀釋組溶于2 ml潤濕劑稀釋液（潤濕劑∶水＝1∶1）中，對照組溶于2 ml 的蒸餾水中，超聲30 min。
　　接受液比例：聚乙二醇400∶生理鹽水 = 20∶ 80
　　木犀草素線性關(guān)系考察［2,3］：精密稱取木犀草素對照品10.22 mg置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含木犀草素102.2 μg的對照品儲備液；精密吸取該液0.2，0.5，1，2，4，5，10 ml置10 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含木犀草素2.044，5.11，10.22，20.44，40.88，51.1，102.2 μg的系列對照品溶液，分別精密吸取上述系列對照品溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖，測定結(jié)果見表1，并以對照品濃度x（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積值y值（mau）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線�；貧w方程：y=86.275x，r=0.999 8。結(jié)果表明，木犀草素在0.040 88 ～2.044 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　表1  木犀草素線性關(guān)系考察（略）
　　精密度實(shí)驗(yàn)［4］：①日內(nèi)精密度    配置低、中、高3個濃度的木犀草素對照品溶液，1 d內(nèi)注入液相色譜儀測定3次，測定木犀草素峰面積積分值，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表2。②日間精密度：以上低、中、高3個濃度的木犀草素對照品溶液，測定1次/d，共測定5次。結(jié)果見表3。
　　表2  木犀草素日內(nèi)精密度（略）
　　表3  木犀草素日間精密度（略）
　　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：精密吸取濃度為5.11 μg/ml的對照品溶液20 μl，按上述色譜條件，分別于0，1，2，4，6，8，12，24 h進(jìn)樣，峰面積平均值為 438.9，rsd=1.15%。
　　回收率實(shí)驗(yàn)：精密吸取濃度為0.2 mg/ml的木犀草素對照品溶液5，1，0.5 ml，分別置于10 ml容量瓶中，用空白的透皮接受液（比例為peg400∶ns＝1∶5）定容至刻度，配制成高中低3個不同濃度的溶液。取20 μl進(jìn)樣，測得峰面積，進(jìn)行方法回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表4。
　　表4  木犀草素回收率實(shí)驗(yàn)（略）
　　2.2   潤濕劑的透皮促透作用研究
　　2.2.1   皮膚的選擇和處理取雄性小鼠，斷頸處死，即刻用電動剃毛刀剔出腹部鼠毛，取下皮膚，將取下的皮膚平鋪于干凈的玻璃板上，角質(zhì)層朝下，用鑷子剔除皮下的脂肪組織及黏連物后，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，密封冷凍于-10℃冰箱中保存，于1周內(nèi)使用，每次實(shí)驗(yàn)前目視檢查鼠皮的完整性，如有破損則不得使用。
　　2.2.2   實(shí)驗(yàn)分組加潤濕劑組、加潤濕劑1∶1稀釋組、對照組（不加潤濕劑）。
　　2.2.3   實(shí)驗(yàn)方法向體外透皮吸收儀中加入適量水，開啟電源和恒溫槽磁力攪拌，設(shè)定溫度為（37±0.5）℃，將新鮮離體去毛小鼠的皮膚固定于改良franz擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)，真皮面向接受液。將供給藥物放入供給池中，向接受池內(nèi)注入5 ml接受液，放入透皮吸收儀中，設(shè)定接受池攪拌速度為400 r/min。15 min后開始計時，記為0 min，分別于1，2，3,4,6,8 h取樣，每次取樣的同時需向接受池中補(bǔ)充等量的接受液，樣品通過0.45 μm 微孔過濾膜，測定。結(jié)果見表5。
　　表5  透皮吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
　　3  小結(jié)
　　透皮吸收促進(jìn)劑的加入方式以及與基質(zhì)的相容性是中藥透皮給藥制劑的處方設(shè)計和制備工藝的難點(diǎn)。將促透劑（潤濕劑）與主藥分開，使用時潤濕劑加入的給藥方式回避了透皮給藥制劑處方設(shè)計和制備工藝的難點(diǎn)，同時，類似于利福平滴眼液，這種給藥方式也避免了一些天然活性成分在溶液中穩(wěn)定性差的不足。
　　本研究是為了評價潤濕劑的促透作用，但由于消痛貼膏中的可測成分木犀草素含量較低（僅為0.084 %），研究中在消痛貼主藥提取物中加入木犀草素單體作為模型藥物，這樣增加了透皮吸收的成分檢測的可行性；同時，較單獨(dú)用化學(xué)單體為模型藥物，更好模擬了制劑中其他成分存在的情況下的透皮吸收行為。
　　研究表明消痛貼膏的潤濕劑中含有樟腦、冰片等成分，正是由于這些成分的存在，使?jié)櫇駝┚哂辛似つw促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與對照組滲透系數(shù)0.373 2相比，加潤濕劑組滲透系數(shù)3.968 1，滲透系數(shù)增加10.63倍，說明潤濕劑能增加消痛貼膏中木犀草素的滲透速率和累積透過量。同時實(shí)驗(yàn)中將潤濕劑稀釋1倍，結(jié)果稀釋組比對照組滲透系數(shù)增加4.18倍，說明潤濕劑的促透作用與樟腦、冰片等起促透作用的成分有一定的量-效關(guān)系。
　　研究中還以消痛貼膏主藥等劑量制備成凝膠劑，同法測定，結(jié)果在接受液中很難檢測到木犀草素。實(shí)驗(yàn)中還考察過氮酮及潤濕劑在凝膠劑中的促透作用，僅加氮酮組6 h后能檢測到目標(biāo)峰，但峰面積很小，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測下限附近。說明木犀草素可能被凝膠劑中的大分子基質(zhì)包裹，不宜釋放。提示外用透皮吸收制劑在進(jìn)行劑型改革時，需要進(jìn)行皮膚滲透實(shí)驗(yàn)的比較研究。對于需要透皮吸收的成分，凝膠劑可能不完全適用。
　　【參考文獻(xiàn)】
　�。�1］ 國家藥典委員會。 中國藥典，ⅰ部［s］。 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2005: 184.
　�。�2］ 劉蘭生， 宋 陽， 揚(yáng) 錫，等。 高效液相色譜法測定奇正消痛貼膏中木犀草素的含量［j］。中國藥事， 2006, 20 （7）： 418.
　�。�3］ 徐春波， 溫 艷， 閆美霞。 獨(dú)一味分散片中木犀草素和總黃酮的含量測定［j］。 中成藥， 2006, 28 （9）： 1389.
　　［4］ 汪鳳梅， 姚彤煒， 曾 蘇。 hplc測定四方蒿中總木犀草素苷的含量［j］。 中國藥學(xué)雜志， 2005, 40 （8）： 618.